不同组织的石蜡切片切片要点

一、石蜡切片概述

石蜡切片是组织切片制作最常用的一种技术，其基本步骤包括取材、固定、脱水、浸蜡、包埋、切片、染色和封片等，其中切片是最重要的环节。石蜡切片的制作遵循“精细预处理、逐步硬化”的逻辑，工序繁琐且耗时较长，全程需12 - 24小时。采集后的组织标本需先放入4%甲醛溶液固定6 - 24小时，锁住细胞原始形态，防止自溶变形；随后经梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡浸透等多道工序，逐步替换组织内水分，让石蜡充分渗透组织，冷却后形成坚硬的石蜡块，最后用切片机切成3 - 5微米的薄片，经染色、封片完成制作。这套流程虽耗时久，但能最大程度保留组织形态和细胞结构，为精准诊断奠定基础。

二、不同组织的切片要点

（一）淋巴结等实性组织

1. 展片：水温在35℃左右较为适宜。若水温过高，切片上的小皱褶打不开；若水温过低，切片则不平坦，且贴片不牢，容易脱片。
2. 染色：染苏木精时应比常规时间短，一般3 - 5分钟即可，也可以单设置一种染色程序专门用于淋巴结等实性组织的染色。这样切出的片子既完整，又无裂隙，且连片。

（二）脂肪组织

1. 固定与浸蜡：脂肪组织内充满脂肪滴，不易被脱水剂完全溶解，石蜡也不能完全浸透，故组织不能被很好地固定。因此，固定和浸蜡时间相对延长是关键，同时取材也不宜过厚。
2. 切片：切片时修至最大面后，用冰块贴到蜡块上冰5 - 10秒后再立即切片，低温可暂时使未脱透的脂肪滴凝固，从而切出较完整的组织。切片厚度可调整为5 - 6μm。
3. 裱片与捞片：速度要快，裱片温度不易超过42℃。

（三）骨髓及骨组织

1. 脱钙：骨髓及骨组织制片中脱钙是关键步骤。骨髓组织常采用7%盐酸水溶液脱钙，因送检的骨髓组织硬度不同，所以脱钙时间很重要。时间太短组织较硬，切片时不连片；时间太长组织发灰影响诊断。骨髓组织在脱钙液中漂起即可，一般为2 - 5分钟。骨组织在切片前也要经脱钙处理，常用的脱钙液是17%硝酸水溶液，时间为12 - 24小时，或用大头针能扎透为准。
2. 切片：切片前蜡块一定要慢修、薄修，尤其对较薄的骨片，这样切片时骨组织不会被切掉。
3. 烤片：时间要相对延长，以防脱片。

（四）皮肤组织

1. 脱水：皮肤组织结构复杂，层次多，且各层之间的组织致密程度各不相同，可相对延长脱水时间，以确保脱水效果。
2. 包埋：皮肤及皮下组织要包在同一个面上，这样才能切出皮肤的层次，便于后续观察。
3. 切片：将蜡块内皮肤组织表层朝上夹在切片机夹口上，按照皮肤组织的特点由里至外，最后切角质层，这样才可制作出比较完整的切片。因角质层密度最大、易碎，烤片时间可相对延长以防止脱片。

（五）脑组织

1. 取材：一般组织取材厚度小于2mm，组织脱水不好会影响浸蜡，可适当延长脱水时间。脱水后组织较脆，包埋时要轻夹轻放不能重压，以免将组织压碎。
2. 切片：脑组织容易粘刀、皱褶不易打开，因此要在冰箱冻的时间长一些，切片方法同淋巴结组织。
3. 展片：可先放在凉水中将小皱褶完全打开，再用载玻片移到展片机中充分展片。
4. 烤片：时间不宜过长，避免对组织造成损伤。

三、通用注意事项

（一）刀片使用

应先切小组织或淋巴结等实性组织，后切脂肪、肌肉等组织，最后切骨组织。使用新刀片能保证切片的质量，减少切片过程中出现的问题。

（二）修蜡块与切组织

不要在同一个刀位进行，在一边修好蜡块后移到另一边切片，这样既省刀又能保证质量。如果在同一刀位操作，可能会导致刀片磨损不均匀，影响切片效果。

（三）烤片前控水

最好将刚捞起的切片靠在烤片机边上控水后再烤片，否则水会将组织推散，破坏其完整性。这一步骤虽然简单，但对切片的质量影响较大。

（四）自动化机器操作

可按设置要求恒定制片工作中的温度、时间、程序，避免手工操作中的不稳定因素。自动化操作能够提高制片的效率和质量的稳定性。

（五）试剂管理

一张优质病理切片的固定、脱水、包埋、切片固然重要，但这些步骤保障的是所用试剂的稳定性。应有专人进行试剂的检查、配制、更换和调整，对试剂的浓度、剂量、使用时间、稳定性等都按时记录，以保证质量。试剂的质量直接影响到切片的质量和后续的诊断结果。

四、切片常见问题及解决方法

（一）切片上卷且不能形成连续蜡带

原因可能是切片刀不够锋利、切片刀与蜡块的角度不当、蜡块四周留蜡边太少、石蜡硬度过大，黏度不够。解决方法包括重新磨刀、调整切片刀的角度、重新包埋或将蜡块四周熔化，再放入包埋框中补蜡，修理蜡块时组织块周围保留的石蜡以2mm左右为宜，蜡块过硬可适当加些蜂蜡，或更换熔点较低的石蜡重新包埋。

（二）切片弯曲且不能形成直带

原因有蜡块上下或左右两边不平行、蜡块与切片刀刀口不平行、组织块外形不整齐、切片刀各处的锋利程度不一致。解决方法为将蜡块四边反复修平对称、调节蜡块夹持器，使其与切片刀平行、修整组织块时，注意修切整齐、移动切片刀，更换刀口位置。

（三）切片上出现裂纹

原因可能是切片刀上有小缺口，或刀口不平整，组织中可能含有较硬之物质，如固定液之结晶石灰质，包埋时石蜡冻结太慢。解决方法是切片刀某处有缺口，可调换刀口部位或重新磨刀，刀口上缺口过多且不平整，可先将刀锋垂直在磨刀石上轻轻磨数次，然后按常规磨刀；组织中硬性物质太多，则不宜用；纠正包埋时的缺点，一般待蜡块周围凝结一层，即可放入冷水中。

（四）切片粘在切片刀上或蜡块上且不易取下

原因是切片时有静电作用，产生静电吸引，在冬季或气候干燥时常出现这种情况。解决方法可用加湿器，以增加空气中的水分，而减少静电作用。

（五）切片厚薄不均

原因可能是切片微动部分失灵，齿轮跳格，蜡块太大，过硬，转动时刀刃受震动。解决方法是修理切片机失灵的部分，调整螺旋，加机油润滑零件，必要时需请专业技术人员调整切片机；如蜡块过大，以后取材时注意取材的大小，蜡块组织过硬，可返回水中浸泡，再重新脱水和包埋。

（六）切片碎烂或组织脱出并与石蜡分离

原因包括组织脱水，透明不够，浸蜡时间过长，浸蜡温度过高，组织脱出是由于脱水、透明时间不够，或组织中含有乙醇等，石蜡不易渗入组织中，故导致石蜡与组织分离，二甲苯使用时间过久。解决方法是必须按组织大小厚薄选择脱水、透明时间，依组织的性质和结构特点确定浸蜡时间，控制包埋温度，一般这种情况难以补救；脱水，透明渗蜡不够，应重新熔化，退回入二甲苯和酒精，再进行渗蜡包埋；更换二甲苯。

（七）切片皱褶太多且不能完全展开

原因可能是石蜡太软或室温过高，切片刀上粘有残余的石蜡，刀口不干净，组织浸蜡时间不够，或脱水、透明不够。解决方法需根据具体原因进行调整，如更换合适的石蜡、清洁切片刀、延长浸蜡时间、重新进行脱水和透明处理等。

五、包埋注意事项

（一）包埋方向

一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋；食管、胃、肠等组织须将管壁横断面朝下包埋，若在同一蜡块中包埋数块管壁组织时，应平行横埋且黏膜面（内膜）的方向应一致，以便切片及观察。

（二）组织选择

同一蜡块包埋多个组织块时，组织的性质应相同，方向要一致，不能把大小、厚薄差别悬殊的组织包埋在一起，组织块间的距离不能太大。皮肤、骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋。神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。

（三）操作速度

包埋（尤其在室温较低的情况下）操作应迅速，防止组织块变凉、蜡液凝结及出现气泡，组织块与蜡液不能很好凝固定在一起，导致组织与蜡分离。遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时，不能将小标本放入其他标本的管腔或空洞内。

六、切片前的准备工作

（一）修切蜡块

切片前应先修块，即切去组织周围过多的石蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。

（二）切片用品准备

切片刀要预先磨好，确保其锋利度。同时，还需要准备好展片所需的设备和材料，如展片机、载玻片等，以保证切片过程的顺利进行。

综上所述，不同组织的石蜡切片制作有其各自的要点和注意事项。在实际操作中，需要根据组织的特点进行相应的处理，同时注意通用的注意事项和切片过程中可能出现的问题及解决方法，以制作出高质量的石蜡切片，为病理诊断提供可靠的依据。