切好石蜡切片的技巧

前期准备工作

在进行石蜡切片之前，充分的前期准备工作至关重要，它是保证切片质量的基础。首先是材料的选取，要根据制片的目的和要求来采集材料，确保其具有代表性和完整性，并且无病虫害及其他损伤。一般来说，组织块的规格以 3 - 5mm×3 - 5mm×10 - 15mm 为宜，若厚度超过 5mm 可能会影响固定液的充分渗透。例如在进行植物组织切片时，需要选取生长状态良好、无病变的部位。

接着是固定液的选择和使用。常用的固定液有 4%多聚甲醛、10％福尔马林、Bouin 氏固定液等。固定液用量一般为组织块体积的 10 - 20 倍，固定时间根据组织类型和大小而定，通常为 6 - 24 小时。其作用是防止组织溶解及腐败，使细胞内各种成分沉淀保存下来，保持其原有的生活结构，同时使细胞硬化不容易变形，利于后续处理。如果材料漂浮在固定液表面，可用注射针管或抽气机进行抽气处理，直至材料全部浸入固定液。固定完毕的材料，若不能立即制片，可放于 70%酒精中存放。

所需的设备和试剂也需提前准备好。设备包括切片机、恒温箱、溶蜡箱、玻璃缸、载玻片、盖玻片、手术刀片、镊子、包埋盒等；试剂有酒精、二甲苯、固体石蜡、苏木精、酸水、氨水、酒精伊红染色剂型、加拿大树胶等。

脱水与透明处理

脱水是石蜡切片过程中的重要环节，其目的是除去组织内多余的水分，使材料变硬，形状愈加稳定，利于材料的保存和下一步的透明、浸蜡等操作。常用的脱水剂为酒精，脱水原则是从低浓度逐级移入高浓度，否则会引起材料的强烈收缩而变形。一般是从 70%酒精开始，依次经过 80%、90%、95%酒精，最后到无水乙醇（可进行两次无水乙醇处理）。材料在各级酒精中处理的时间视材料大小和性质而定，通常每级停留 1 - 2 小时，无水酒精每次停留 1.5 - 3 小时，已切好的切片每级停留 3 - 20 分钟。

透明处理是为了除去脱水剂，使材料透明并增加折光系数，同时便于包埋剂（石蜡）进入组织中。最常用的透明剂为二甲苯，使用时也要逐渐进行，可减少材料收缩。一般是先将组织放入无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）中，然后依次放入二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ，每级浸泡时间约 30 分钟至 1 小时。

浸蜡操作要点

浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，一般将恒温箱调至 58℃。浸蜡通常有两种方式，一种是将透明后的组织放入二甲苯与石蜡混合液（1:1）中，然后依次放入石蜡Ⅰ和石蜡Ⅱ；另一种是将材料分别放入 25%、50%、75%的石蜡 - 二甲苯溶液中，每级 30 分钟，该过程在高于石蜡熔点 3℃的温箱中进行，之后再将材料放入溶解的纯蜡中，时间为 30 分钟，此过程重复两次。浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片的质量。

包埋过程技巧

包埋是将浸蜡后的组织块固定在石蜡中，以便后续切片。首先要制备好包埋容器，如折叠一小纸盒或使用包埋盒。将溶解好的石蜡在加入包埋容器中，石蜡溶解后应过滤后使用，以免含杂质影响切片。然后迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中，注意组织块在蜡块中的位置摆放，如果包埋的组织块较多，应进行编号。最后将包埋容器放置在冷水上加速冷却过程，使蜡块迅速冷却硬固，组织块在蜡块中可长期保存。

切片机操作规范

切片机的操作需要熟练掌握，才能切出高质量的石蜡切片。在切片前，要对包埋后的组织块进行修整，用刀片修成方形或长方形蜡块。然后以少许热蜡液，将蜡块底部粘附于小木块上，以少许石蜡融化在蜡块边缘，使其更好地固定在切片机上。

切片时，要根据切片的要求调整切片机的厚度，一般石蜡切片的厚度为 3 - 7μm。切片过程中，要保持切片机的稳定运行，切片速度要均匀，避免过快或过慢。如果切片出现破碎、褶皱等问题，可能是切片机的刀片不够锋利、切片速度不均匀或组织块浸蜡不彻底等原因造成的。此时需要检查刀片是否需要更换，调整切片速度，并重新检查浸蜡情况。

切片后处理方法

切好的石蜡切片需要进行展片和捞片处理。将切好的薄片漂浮在温水表面，使切片展平。水温一般控制在 40 - 50℃，水温过高可能会导致切片变形，水温过低则切片不易展平。然后用载玻片将展平的切片捞起，放在 60℃左右的烤片机上烤片 1 - 2 小时，使切片牢固地黏附在载玻片上。

之后还需要进行脱蜡、水化、染色、脱水、透明和封片等处理。脱蜡是将烤好的切片依次放入二甲苯、不同浓度的乙醇中进行脱蜡和水化，使切片回到水相。染色常用苏木精 - 伊红（HE）染色，先经苏木精染液染色，水洗后用盐酸酒精分化，再经伊红染液染色。染色后的切片依次经过梯度乙醇脱水、二甲苯透明，最后用中性树胶封片，这样切片标本就可以长期保存和观察了。

在整个石蜡切片过程中，每一个环节都相互关联，任何一个环节出现问题都可能影响最终的切片质量。因此，需要严格按照操作规范进行，并且不断积累经验，才能切出高质量的石蜡切片。