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石蜡切片：原理、制作与应用

2026-04-10 11:07

石蜡切片：原理、制作与应用

一、石蜡切片的基本概述

石蜡切片是病理切片制作中常用的方法，在医学诊断和科研领域具有至关重要的地位。它是将人体或动物的病变组织经过特殊处理，切成极薄的切片，通过显微镜观察其微观结构的一种病理标本。简单来说，就像一张“细胞的照片”，把病变组织的形态、细胞变化等信息定格在玻片上，供病理医生分析诊断。它常用于癌症、炎症、感染等疾病的确诊，被誉为临床诊断的“金标准”之一。在植物学研究中，也可用于分析植物茎干木质部特征等。

二、石蜡切片的制作流程

取材与固定

取材是石蜡切片的起点，需要精准“捕捉”病变组织。医生在手术或活检中，精准切取病变部位的组织样本，要求新鲜、完整，避免挤压或污染。组织块大小通常控制在2.0cm×2.0cm×0.3cm左右，以确保后续处理均匀有效。取下组织后，需立即用固定液处理，常用的固定液如4%多聚甲醛、10%的中性福尔马林等，目的是防止细胞分解或变形，将细胞结构“定格”在病变时的状态，为后续观察保留真实信息。固定时间根据组织类型和大小而定，一般为4 - 24小时。

脱水与透明

组织中的水分会影响切片和染色，所以需要进行脱水处理。把固定好的组织依次经过不同浓度的乙醇溶液进行脱水，一般从70%、80%、90%、95%到100%乙醇，每个梯度浸泡1 - 2小时，去除组织中的水分。脱水完成后，将组织放入二甲苯等透明剂中，使组织透明，便于石蜡渗透，浸泡时间约30分钟至1小时。

浸蜡与包埋

将透明后的组织放入融化的石蜡中，在56 - 60℃的温箱中进行浸蜡，一般经过2 - 3次，每次1 - 2小时，确保石蜡完全渗透到组织中。随后将浸蜡后的组织放入包埋模具中，倒入融化的石蜡，待石蜡冷却凝固后，组织就被包埋在石蜡块中，便于切片机切割成薄片。

切片与展片

使用切片机将石蜡块切成厚度为3 - 5μm的薄片，这是一个需要极高技巧的过程。将切好的薄片漂浮在温水表面，使切片展平，避免切片皱褶或断裂。然后用载玻片将展平的切片捞起，放在60℃左右的烤片机上烤片1 - 2小时，使切片牢固地黏附在载玻片上。

染色与封片

首先要进行脱蜡与水化，将烤好的切片依次放入二甲苯、不同浓度的乙醇中进行脱蜡和水化，使切片回到水相。常用苏木精 - 伊红（HE）染色，先经苏木精染液染色，水洗后用盐酸酒精分化，再经伊红染液染色。染色后的切片依次经过梯度乙醇脱水、二甲苯透明，最后用中性树胶封片，防止褪色和污染，使其长期保存。

三、石蜡切片制作中的常见问题及解决方法

切片上卷且不能形成连续蜡带

可能的原因包括切片刀不够锋利、切片刀与蜡块的角度不当、蜡块四周留蜡边太少、石蜡硬度过大，黏度不够。解决方法是重新磨刀；调整切片刀的角度；可重新包埋或将蜡块四周熔化，再放入包埋框中补蜡，修理蜡块时组织块周围保留的石蜡以2mm左右为宜；蜡块过硬可适当加些蜂蜡，或更换熔点较低的石蜡重新包埋。

切片弯曲且不能形成直带

原因可能是蜡块上下或左右两边不平行、蜡块与切片刀刀口不平行、组织块外形不整齐、切片刀各处的锋利程度不一致。解决办法是将蜡块四边反复修平对称；调节蜡块夹持器，使其与切片刀平行；修整组织块时，注意修切整齐；移动切片刀，更换刀口位置。

切片上出现裂纹

这可能是因为切片刀上有小缺口，或刀口不平整；组织中可能含有较硬之物质，如固定液之结晶石灰质；包埋时石蜡冻结太慢。解决方法为切片刀某处有缺口，可调换刀口部位或重新磨刀。刀口上缺口过多且不平整，可先将刀锋垂直在磨刀石上轻轻磨数次，然后按常规磨刀；组织中硬性物质太多，则不宜用；纠正包埋时的缺点，一般待蜡块周围凝结一层，即可放入冷水中。

切片粘在切片刀上或蜡块上且不易取下

切片时有静电作用，产生静电吸引，在冬季或气候干燥时常出现这种情况。解决方法是可用加湿器，以增加空气中的水分，而减少静电作用。

切片厚薄不均

原因可能是切片微动部分失灵，齿轮跳格；蜡块太大，过硬，转动时刀刃受震动。解决办法是修理切片机失灵的部分，调整螺旋，加机油润滑零件，必要时需请专业技术人员调整切片机；如蜡块过大，以后取材时注意取材的大小。蜡块组织过硬，可返回水中浸泡，再重新脱水和包埋。

切片碎烂或组织脱出并与石蜡分离

可能是组织脱水，透明不够；浸蜡时间过长，浸蜡温度过高；组织脱出是由于脱水、透明时间不够，或组织中含有乙醇等，石蜡不易渗入组织中，故导致石蜡与组织分离；二甲苯使用时间过久。解决方法是必须按组织大小厚薄选择脱水、透明时间；依组织的性质和结构特点确定浸蜡时间，控制包埋温度，一般这种情况难以补救；脱水，透明渗蜡不够，应重新熔化，退回入二甲苯和酒精，再进行渗蜡包埋；更换二甲苯。

四、石蜡切片在医学诊断中的应用

疾病确诊

病理切片是医生手中的“显微镜下的真相”，是揭开疾病奥秘的关键工具。通过显微镜下观察切片，病理医生能确诊疾病类型，比如区分良性与恶性肿瘤。良性肿瘤细胞通常形态规则，与周围组织界限清晰；而恶性肿瘤细胞形态不规则，核大、深染，可浸润周围组织。还能识别感染病原体，如细菌、病毒等，不同的病原体在切片上有不同的表现特征。同时也可以判断炎症程度，根据炎症细胞的数量、类型和分布来确定炎症的轻重。

指导治疗

根据细胞特征，为医生制定手术方案、化疗方案等提供重要依据。例如，对于癌症患者，通过切片观察肿瘤的分级、分期等，医生可以决定是进行局部切除还是根治性手术，以及是否需要辅助化疗或放疗等。

预后评估

石蜡切片还可以用于评估患者的预后情况。某些肿瘤细胞的特定标志物在切片上的表达情况，与患者的生存率、复发率等密切相关。医生可以根据这些信息，对患者的预后进行预测，为患者提供更个性化的治疗和随访建议。

五、石蜡切片在科研领域的应用

植物学研究

在植物学研究中，石蜡切片可用于分析植物茎干木质部特征等。例如，一种用于分析马尾松茎干木质部特征的石蜡切片制备方法，对石蜡切片的制备步骤进行改进，包括软化剂选择、木质部分段、染色时间调整等步骤，可获得马尾松茎干组织完整、结构清晰的石蜡切片，易于观察测量马尾松茎干木质部解剖特征。通过对石蜡切片的观察，可以研究植物的生长发育过程、组织结构变化等。