引言

在现代医学领域中，准确且快速的病理诊断对于手术方案的制定和患者的治疗效果起着至关重要的作用。尤其是在手术进行过程中，医生需要及时了解病变组织的性质、肿瘤的良恶性以及是否发生转移等信息，以便做出正确的手术决策。而冷冻切片技术作为术中病理诊断的重要手段，能够在短时间内为医生提供关键的病理信息，帮助其迅速调整手术方案，是衡量医院病理诊断水平与临床救治能力的核心技术之一。以下将详细探讨冷冻切片在术中病理诊断中的相关应用情况。

一、冷冻切片的概述

（一）定义与原理

冷冻切片，又称冰冻切片，是一种通过快速冷冻组织样本并在低温条件下切片的技术。它的原理是使用液氮或低温冷冻剂（如OCT化合物）使组织在短时间内凝固，减少冰晶形成，避免细胞结构破坏。随后在恒冷切片机（通常设定在 -20℃ 至 -30℃）中切割组织，保持样本硬度，确保切片完整。最后采用 HE（苏木精 - 伊红）染色或特殊染色法，使细胞核和细胞质清晰可见，便于病理医生观察。

（二）与传统石蜡切片的对比

传统的石蜡切片需要数天时间才能完成制片，这在手术过程中显然无法满足及时诊断的需求。而冷冻切片能够在 10 - 20 分钟内完成制片，从取样到出结果仅需 15 - 30 分钟，大大缩短了诊断时间，适用于术中快速病理诊断。不过，石蜡切片的组织形态保存较好，确诊率可高达 99% 左右；而冷冻切片由于组织未经固定和充分处理，细胞形态可能发生变化，加上冰晶可能造成细胞空泡化，影响细节观察，其确诊率处于 90% - 95% 就已经非常不错了。此外，石蜡切片可存档数十年，而冰冻切片通常仅能短期保存。

二、冷冻切片的操作流程

（一）样本取材

在手术过程中，外科医生将新鲜组织送至病理科。病理技师需要选取最具代表性的部位，如肿瘤边缘或可疑病变区，同时要避免选取坏死或出血区域，因为这些区域的细胞结构已经遭到破坏，可能会影响诊断结果的准确性。

（二）组织冷冻

根据组织样本的大小和特性，采用不同的冷冻方法。小样本可直接放入恒冷切片机的冷冻台进行直接冷冻；较大或易碎的组织需用 OCT（Optimal Cutting Temperature）胶包埋，以提供支撑；某些特殊研究（如酶活性检测）需用液氮（ -196℃）急速冷冻，减少冰晶损伤。

（三）切片

将冷冻的组织块固定在切片机上，调整切片厚度（通常为 4 - 10 微米），然后用防卷板平整切出薄片，并将其贴附于玻片上。切片的厚度对于病理诊断至关重要，过厚或过薄都可能影响细胞结构的观察和诊断的准确性，这就对操作人员的技术水平提出了较高的要求。

（四）固定与染色

切片经甲醇或乙醇固定后，进行快速 HE 染色。苏木精染细胞核使其呈蓝色，伊红染细胞质使其呈粉红色，通过这种染色方法可以使细胞核和细胞质清晰区分，便于病理医生在显微镜下观察细胞的形态和结构。

（五）封片与阅片

滴加树脂封固剂，盖上盖玻片，将标本固定好。最后由病理医生在显微镜下进行诊断，观察细胞的形态、结构以及组织的病理特征，从而做出准确的病理诊断。

三、冷冻切片在术中病理诊断中的适用情况

（一）即时诊断病变性质

在手术过程中，当需要立即确定病变组织的性质（如肿瘤、非肿瘤、良性 / 恶性等）时，冷冻切片能够发挥重要作用。例如，在乳腺肿块切除手术中，如果乳腺肿块切除后的冰冻报告显示为良性的纤维腺瘤，则手术可以结束；如果报告显示为乳腺癌，则需要扩大手术范围，以避免患者经历二次手术，提高治疗效果。

（二）肿瘤扩散评估

了解恶性肿瘤的扩散情况，包括是否存在区域淋巴结转移等，对于制定手术方案和判断患者的预后非常关键。冷冻切片可以在术中快速检测淋巴结是否受累，帮助医生确定是否需要进行淋巴结清扫手术。比如在肺癌手术中，通过冷冻切片检查淋巴结是否有癌细胞转移，从而决定手术的范围和后续的治疗方案。

（三）切缘评估

在切除恶性肿瘤时，确保切缘没有肿瘤组织残留是手术成功的关键之一。如果术中冷冻病理报告显示切缘阳性，则需要进一步扩大切除范围，以降低肿瘤复发的风险。例如在皮肤基底细胞癌的切除手术中，通过冷冻切片对切缘组织进行检查，及时发现可能残留的肿瘤细胞，保证手术的彻底性。

（四）确认切除组织

对于一些需要确认切除组织的手术，如甲状旁腺及输卵管、输精管等切除手术，冷冻切片可以帮助医生确认所切除的组织是否正确，避免手术失误。

四、冷冻切片在术中病理诊断中的优势

（一）诊断速度快

这是冷冻切片最显著的优势之一。在手术过程中，时间就是生命，快速的病理诊断能够使医生及时了解病变情况，迅速做出手术决策。一般来说，从接收标本至签发报告，冷冻切片诊断时间在 30 分钟左右，能够满足术中快速诊断的需求，避免患者长时间处于手术状态，减少手术风险。

（二）保留生物活性

冷冻切片能够较好地保留组织的生物活性，这使得它适合用于酶学、免疫组化等研究。某些抗原在石蜡切片中可能被破坏，而冷冻切片能更好地保留蛋白质结构，为科研工作提供了更有价值的样本。

（三）操作相对简便

与石蜡切片相比，冷冻切片无需进行繁琐的脱水、透明等步骤，操作相对简便。这不仅节省了时间，也降低了技术难度，提高了工作效率。

五、冷冻切片在术中病理诊断中的局限性

（一）诊断准确性略有降低

由于冰冻切片组织未经固定和充分处理，细胞形态可能发生变化，导致诊断准确性略有降低。国内外报道的手术中冰冻诊断正确率大约为 97%，虽然这个比例已经比较高，但仍然存在一定的风险，不能完全避免误诊或漏诊的情况。有时会出现“待常规进一步诊断”或“具体待石蜡”等提示，需要结合后续的常规石蜡切片检查结果来确保诊断的准确性。

（二）样本选择受限

并非所有的组织样本都适合进行冷冻切片检查。例如，脂肪组织、骨组织和钙化组织由于其自身的特性，在冷冻过程中容易出现冰晶，影响切片的质量和诊断准确性；过小的标本（检查大小 ≤ 0.2cm）可能无法提供足够的诊断信息；需要通过计数核分裂象来判断软组织肿瘤的良恶性以及主要依据肿瘤的生物学行为特征而非组织学形态来判断肿瘤良恶性的情况，冷冻切片的诊断价值也相对有限；此外，术前易于进行常规活检的情况一般也不建议采用冷冻切片检查。

（三）技术要求高

冷冻切片的质量和诊断准确性与操作人员的经验和技术水平密切相关。切片厚度的控制、染色质量等都依赖于操作者的熟练程度和专业技能。如果操作不当，可能会导致切片质量不佳，影响病理医生的观察和诊断。

六、提高冷冻切片在术中病理诊断应用效果的策略

（一）加强人员培训

提高病理科工作人员的专业素质和操作技能是提高冷冻切片诊断质量的关键。医院应定期组织专业培训，让病理技师和病理医生掌握最新的冷冻切片技术和诊断标准。例如，邀请相关领域的专家进行讲座和实操指导，组织内部的病例讨论和经验交流活动，提高工作人员的业务水平和应对复杂情况的能力。

（二）优化设备和试剂

先进的设备和优质的试剂是保证冷冻切片质量的基础。医院应及时更新冷冻切片机等设备，确保其性能稳定、切片质量好。同时，选择合适的染色试剂和冷冻剂，优化染色和冷冻过程，提高切片的清晰度和诊断准确性。

（三）规范操作流程

制定严格的操作流程和质量控制标准，确保冷冻切片的每一个环节都符合规范。从标本取材、组织冷冻、切片制作到染色、阅片等各个步骤，都要有明确的操作指南和质量要求。加强对操作过程的监督和管理，及时发现和纠正不规范的操作行为。

（四）加强多学科协作

术中病理诊断需要临床医师与病理医师密切合作。临床医师应了解冷冻切片诊断的相关知识和局限性，在手术过程中及时、准确地提供患者的临床信息，与病理医师共同讨论诊断结果，制定合理的手术方案。同时，病理医师也应积极参与临床病例讨论，了解手术的需求和患者的病情，提高诊断的准确性和针对性。

七、结语

冷冻切片技术在术中病理诊断中具有重要的应用价值，它能够在短时间内为医生提供关键的病理信息，帮助其迅速调整手术方案，提高手术的成功率和患者的治疗效果。然而，冷冻切片也存在一定的局限性，如诊断准确性略有降低、样本选择受限和技术要求高等。为了充分发挥冷冻切片在术中病理诊断中的作用，需要加强人员培训、优化设备和试剂、规范操作流程以及加强多学科协作。只有这样，才能不断提高冷冻切片的诊断质量，为患者的健康提供更有力的保障。随着医学技术的不断发展，相信冷冻切片技术在术中病理诊断中的应用将会更加广泛和完善。